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配制高效液相色谱仪的流动相,需要仔细流动相试剂的选择

发布时间:2021-10-25浏览:734

1.色谱纯。液相色谱仪所用的试剂必须是色谱纯级别的,而且使用之前需要抽滤经过0.45um或者0.22um的微孔滤膜,除去试剂中的细小颗粒和其他杂质,以免溶剂残留的杂质在色谱柱长期累积,降低柱效和寿命。

2.粘度。一般要求流动相的粘度应小于2cp,若使用高粘度溶剂,势必会增高柱压,不利于分离。常用的低粘度溶剂有乙腈、丙酮、乙醇等。

3.溶解性。溶剂对于待测样品,必须具有合适的极性和良好的选择性,符合相似相溶的原则,以免样品沉淀在液相色谱仪系统中特别是色谱柱中,日积月累降低柱效。

液相色谱仪

4.溶剂要与检测器匹配。对于液相色谱仪紫外吸收检测器,应注意选用的检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。截止波长是指某一个特定的波长,超过这个波长的紫外线,紫外检测器对其几乎不响应,或者说响应很小。对于示差检测器,要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相,来达到最好的灵敏度。

5.缓冲盐和PH。用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时,通过调节流动相的pH值,来抑制样品目标物的解离,增加目标物在固定相上的保留,并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。一般样品溶液是酸性时,会在流动相中加入少量甲酸,醋酸或者磷酸来提高液相的分离度和改善峰形,但一定注意流动相的PH在色谱柱的耐受酸碱度范围内。样品溶液是碱性时则相反。可以根据目标物的pKa来确定pH,根据pH选择缓冲盐的种类,常用的缓冲盐溶液有乙酸铵,磷酸盐,三乙胺等。

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