高效液相色谱日常维护要点-过滤

今天就带大家具体了解下高效液相色谱必不可少的步骤—过滤。

任何颗粒物进入HPLC系统后都会在柱子入口端被筛板挡住，最后的结果是将柱子堵塞，一般表现出的特征是系统压力增加并使色谱峰变形，从而导致检测不能正常进行。因此，要采取各种预防措施，包括操作步骤和商品仪器自身的各种过滤设计，努力防止或减少颗粒物进入HPLC系统中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并提高数据的可靠性。

小编做了简单总结，一般在HPLC系统中，颗粒物的主要来源有三个途径：被测样品、流动相和仪器系统部件的磨损物。

颗粒物的主要来源

01 被测样品

液相系统中的第一类颗粒物来源是被测样品。有过实验经验的小伙伴都知道，在将样品上机之前，所有样品都先通过一个0.45μm针筒式过滤器过滤。这是一个有效除去被测样品中颗粒物的方法。但是这个过程也有一点美中不足就是：在使用针筒式过滤器就不可能100%得到通过过滤器的被测样品，总会有或多或少的丢失。

02 流动相

液相系统中的第二类颗粒物来源是流动相。如果HPLC系统中存在颗粒杂质，那么系统中的几个部件都不可以良好地运行。这些部件包括比例阀、止回阀、管路和色谱柱的滤头。由于这个原因，使用没有颗粒杂质的流动相非常重要。如果不是使用HPLC级别的溶剂作为流动相。那么流动相的组成成分必须在加入储液瓶之前经过过滤。对于那些受监管的工作环境，应该有一份标准操作程序(SOP)的书写文档，说明什么时候有必要对流动相进行额外过滤，什么时候不必要。

使用预先过滤过的溶剂是避免杂质颗粒进入流动相的最简单的方法。市场上销售的HPLC级别的溶剂在包装前预先经过亚微粒(通常为0.2μm)过滤器过滤。实验室里(比如Milli-Q水净化处理)准备的HPLC级别的水最后一步要通过0.2μm的过滤器过滤。如果在流动相里只用HPLC级别的液体，一般共识的就是不需要在使用之前操作任何额外的过滤程序。然而，假如使用的是非HPLC级别的试剂或者在流动相里加入了任何固体的试剂(比如磷酸盐缓冲剂)，那么最明智的做法就是在使用之前过滤所有的流动相混合物。

流动相可以很容易地通过流动相真空抽滤装置来过滤。一般步骤是首先将微孔滤膜(通常孔径0.5μm)放置在漏斗和真空烧瓶之间的支撑滤头上。然后把溶剂倒入漏斗然后在真空泵的协助之下，收集(过滤后的)溶剂。抽滤器生产商为不同的过滤应用提供了合适的过滤器材料的选择指导。比如，PTFE微孔滤膜具有疏水性，适用于纯有机溶剂，比如甲醇或者乙腈，但因为非极性很强因此不适用于快速过滤水。真空烧瓶之间的密封材料是用磨砂玻璃制成的，或者是一种“惰性”的瓶塞(比如硅酮)，但是最好还是不要让流动相和瓶塞接触。

03 仪器系统部件的磨损物

最后，在HPLC系统中颗粒物的另一类主要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。关于输液泵密封垫的磨损更换有两种不同建议。

第一种建议认为：在一般实验室中输液泵密封垫通常使用寿命为六个月到一年，因此建议半年或一年更换这些密封垫。

第二种建议认为：原装密封垫的密封效果最好，更换以后容易引起流动相渗漏。所以，只要不漏液就不要轻易更换密封垫。

到此为什么需要过滤的具体原因和日常过滤的具体方法，在这里就差不多介绍完了。下期小编将继续带领大家去具体了解高效液相色谱日常维护要点—冲洗。

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